Осюмликлернинъ махсуслашкъан метаболизмининъ шекиллерини анълатмакъ ичюн чешит осюмликлернинъ къорчаланув назариелери муим назарий ёлбашчылыкъны темин этелер, амма оларнынъ эсас тахминлери сынавдан кечирильмек керек. Мында биз айры осюмликлерден популяцияларгъа ве якъын сойдаш тюрлерге тютюннинъ зайыфлаштырылгъан штаммларынынъ метаболомыны систематик суретте огренмек ичюн тарафсыз тандем масса спектрометриясы (МС/МС) талилини къулландыкъ ве малюматтаки муреккеп спектрлерге эсаслангъан чокъ сайыда масса спектрометрик хусусиет назариелерини ишледик. Оптимал къорчалав (ОМ) ве арекеттеки нишан (АМ) назариелери эсас тахминлерини сынамакъ ичюн рамка. Осюмликлернинъ метаболомикасынынъ малюмат компоненти ОД назариесинен келише, амма от ашагъан айванларнынъ себебинден пейда олгъан метаболомика динамикасы акъкъында МТ назариеси эсас тахминине къаршы келе. Микродан макро эволюцион ольчюгедже ОД-нинъ эсас детерминанты оларакъ ясмонат сигналы белли этильди, этилен сигналы исе МС/МС молекуляр агъынен аннотациялангъан от ашагъанларгъа хас джевапнынъ индже тюзетильмесини темин этти.
Чешит къурулышлы махсус метаболитлер осюмликлернинъ этраф муитке уйгъунлашувында, хусусан душманлардан къорчаланувда эсас иштиракчилердир (1). Осюмликлерде расткельген махсус метаболизмнинъ аджайип чешитлешмеси онынъ экологик функцияларынынъ чокъ тарафлары боюнджа онйыллыкълар девамында терен араштырмаларгъа стимул берди ве осюмликлернинъ мудафаа назариелери узун бир джедвелини тешкиль этти, бу исе осюмликлернинъ ве боджеклернинъ озьара тесирининъ эволюцион ве экологик инкишафыдыр. Эмпирик араштырмалар муим ёлбашчылыкъ этелер (2). Лякин бу осюмликлерни къорчалав назариелери гипотезалы дедуктив фикир юрютювнинъ норматив ёлунен кетмедилер, анда эсас тахминлер айны талиль севиесинде эдилер (3) ве назарий инкишафнынъ невбеттеки девирини илерилетмек ичюн эксперименталь сынавдан кечирильди (4). Техникий сынъырлавлар малюмат топлавыны белли бир метаболизм категорияларынен сынъырлай ве махсуслаштырылгъан метаболитлернинъ эр тарафлама талилини истисна эте, бойлеликнен, назарий инкишаф ичюн пек муим олгъан категорияларара тенъештирювлернинъ огюне кете (5). Метаболизмнинъ эр тарафлама малюматынынъ ве чешит осюмликлер группалары арасында метаболизм босагъасынынъ ишлев иш акъыны тенъештирмек ичюн умумий валютанынъ олмамасы тарланынъ ильмий пишкинлигине кедер эте.
Тандем масса спектрометриясы (ТМС/МС) метаболомикасы саасындаки сонъки инкишафлар берильген система кладынынъ тюрлери ичинде ве олар арасындаки метаболизм денъишмелерини эр тарафлама характеристика бере биле, эм де бу муреккеп къарышмалар арасындаки къурулыш бенъзешмесини эсапламакъ ичюн эсаплав усулларынен бирлештириле биле. Химияны эвельден бильмек (5). Талиль ве эсаплавда илери технологияларнынъ бирлешмеси метаболизм чешитлигининъ экологик ве эволюцион назариелери тарафындан япылгъан бир чокъ тахминлерни узун муддетли сынамакъ ичюн керекли темельни теминлей. Шеннон (6) 1948 сенеси озь ильк макъалесинде малюмат назариеси иле биринджи кере кирсетип, малюматнынъ математик талили ичюн эсас къойды, бу малюмат онынъ ильк къулланувындан гъайры бир чокъ сааларда да къулланылды. Геномикада сыралы консерватив малюматны микъдарджа эсапламакъ ичюн малюмат назариеси мувафакъиетли къулланылды (7). Транскриптомика тедкъикъатларында малюмат назариеси транскриптоманынъ умумий денъишмелерини талиль эте (8). Эвельки араштырмаларда биз осюмликлерде токъума севиесининъ метаболизм экспертизасыны тасвир этмек ичюн малюмат назариеси статистик базасыны метаболомикагъа къулландыкъ (9). Мында биз МС/МС эсасында иш акъыны умумий валютадаки метаболизм чешитлигинен характерленген малюмат назариеси статистик черчивесинен бирлештиремиз, от ашайджылар тарафындан индюкация этильген метаболомнынъ осюмлик мудафаа назариеси эсас тахминлерини тенъештиремиз.
Осюмликлернинъ къорчаланувынынъ назарий темельлери, адет узьре, бири-бирини къаплап алгъан ве эки категориягъа болюнмек мумкюн: осюмликлерге хас метаболитлернинъ даркъалувыны къорчалав функцияларына эсасланып анълатмагъа тырышкъанлар, меселя, оптимал къорчалав (ОД) (10), арекеттеки нишан (МТ) (11) ) Ве тышкъы корюниши (12) дигер механиклернинъ денъишюви. осюмликлернинъ осьмесине ве махсуслашкъан метаболитлернинъ топланувына тесир эте, меселя, углерод: гъыдалы мадделернинъ мувазенеси гипотезасы (13), осьюв сурьаты гипотезасы (14 ), осьюв ве дифференциация мувазенеси гипотезасы (15). Эки назарие топламы талильнинъ чешит севиелериндедир (4). Лякин осюмликлернинъ конститутив ве индукциялангъан къорчалавлары акъкъында лакъырдыда функциональ севиеде къорчалав функцияларыны къаврап алгъан эки назарие укюм сюре: ОД назариеси, осюмликлер озь паалы химиявий къорчалавларына тек керек олгъанда ятырым япкъанларыны фарз эте, меселя, оларны юткъанда От айваны уджюм этсе, демек, келеджектеки мудафаагъа коре, функциясы берильген (10); МТ гипотезасы бойле теклиф эте: ёнелишли метаболит денъишмесининъ кошеси ёкъ, амма метаболит тасавурлы денъише, бойлеликнен, от ашагъан айванларгъа уджюм этмекнинъ метаболизм «арекет нишанына» маниа ола. Яни бу эки назарие от ашагъан айванларнынъ уджюминден сонъ пейда олгъан метаболизмнинъ гъайрыдан шекилленюви акъкъында къаршылыкълы тахминлер япа: къорчалав функциясы олгъан метаболитлернинъ бир ёнелишли топланмасы (ОФ) ве ёнелишсиз метаболизм денъишмелери (МТ) арасындаки багъ (11 ).
ОД ве МТ гипотезалары тек метаболомдаки индукциялангъан денъишмелерни дегиль де, бу метаболитлернинъ топланувынынъ экологик ве эволюцион нетиджелерини, меселя, белли бир экологик муитте бу метаболизм денъишмелерининъ адаптив масрафларыны ве файдасыны да къапата (16). Эр эки гипотеза да махсуслаштырылгъан метаболитлернинъ къорчалав функциясыны таныса да, олар паалы ола билелер я да олмай билелер, ОД ве МТ гипотезаларыны айыргъан эсас прогноз индукциялангъан метаболизм денъишмелерининъ ёнелишиндедир. ОД назариеси тахминине шимдиге къадар энъ чокъ эксперименталь дикъкъат айырылды. Бу сынавларгъа теплицаларда ве табиий шараитлерде специфик бирикмелернинъ чешит токъумаларынынъ догърудан-догъру я да вастасыз къорчалав функцияларыны, эм де осюмликлернинъ инкишаф басамакъларындаки денъишмелерни огренюв кире (17-19). Лякин шимдиге къадар эр бир организмнинъ метаболизм чешитлигини дюньяджа эр тарафлама талиль этмек ичюн иш акъымы ве статистик база олмагъанындан, эки назарие арасындаки эсас фаркълылыкъ прогнозыны (яни метаболизм денъишмелерининъ ёнелишини) сынамакъ керек. Мында, биз бойле талильни кетиремиз.
Осюмликлерге хас олгъан метаболитлернинъ энъ муим хусусиетлеринден бири оларнынъ тек осюмликлерден, популяциялардан башлап, якъын тюрлерге къадар бутюн севиелерде экстремаль къурулыш чешитлигидир (20). Ихтисаслашкъан метаболитлерде чокъ микъдар денъишмелерини популяция ольчюсинде козьде тутмакъ мумкюн, кучьлю кейфиет фаркълары исе, адет узьре, тюр севиесинде сакъланып къалмакъта (20). Демек, осюмликлернинъ метаболизм чешитлиги функциональ чешитликнинъ эсас тарафыдыр, чешит нишаларгъа, хусусан махсус боджеклер ве умумий от ашагъан айванларнынъ чешит инвазия имкянлары олгъан нишаларгъа уйгъунлашувны акс эте (21). Френкельнинъ (22) осюмликлерге хас метаболитлернинъ пейда олув себеплери акъкъында ильк макъалесинден башлап, чешит боджеклернен тесирлешювлер муим сечим басымлары оларакъ бакъыла ве бу тесирлешювлер эволюция девамында осюмликлерни шекиллендирген деп саялар. Метаболизм ёлу (23). Ихтисаслашкъан метаболитлернинъ чешитлигиндеки тюрлерара фаркълар от ашагъан стратегиялардан конститутив ве индукциялангъан осюмликлернинъ къорчаланмасынен багълы физиологик мувазенени де акс эте биле, чюнки эки тюр бири-биринен сыкъ-сыкъ менфий корреляцияда ола (24). Эр вакъыт яхшы къорчалавны сакълап къалмакъ файдалы ола бильсе де, къорчалавнен багълы вакътында япылгъан метаболизм денъишмелери осюмликлерге къыйметли ресурсларны башкъа физиологик ятырымларгъа айырмагъа имкян берювде ачыкъ файда кетире (19, 24), симбиозгъа мухтаджлыкътан къачынмакъта. Залоглы зарар (25). Бундан гъайры, боджек от ашагъанларнынъ себебинден махсуслашкъан метаболитлернинъ бу янъыдан тешкиль этильмеси популяцияда деструктив даркъалувгъа кетире биле (26), ве популяцияда сакъланып къалмакъ мумкюн олгъан ясмон кислотасы (ЯК) сигналындаки муим табиий денъишмелернинъ догърудан-догъру окъувларыны акс эте биле. Юксек ве алчакъ JA сигналлары от ашагъан айванлардан къорчаланув ве белли бир тюрлернен ракъиплик арасындаки компромисслердир (27). Бундан да гъайры, махсуслашкъан метаболит биосинтез ёллары эволюция девамында тез гъайып оладжакъ ве трансформациягъа огърайджакъ, бу исе якъын сойдаш тюрлер арасында ер-ер метаболизмнинъ даркъалувына кетире (28). Бу полиморфизмлерни от ашагъанларнынъ денъишкен шекиллерине джевап оларакъ тез ерлештирмек мумкюн (29), демек, от ашагъанларнынъ джемиетлерининъ денъишмелери метаболизмнинъ гетерогенлигини идаре этеджек эсас фактордыр.
Мында, биз махсус ашагъыдаки меселелерни чездик. I) От ашагъан боджек осюмликлернинъ метаболомыны насыл этип янъыдан конфигурация эте? (ii) Узакъ муддетли къорчалав назариеси тахминлерини сынамакъ ичюн микъдарджа эсапламакъ мумкюн олгъан метаболизм пластичностининъ насыл эсас малюмат компонентлери бар? (Iii) осюмлик метаболомыны уджюмджиге хас олгъан шекильде янъыдан программаламакъ керекми, эгер ойле олса, осюмлик гормоны белли бир метаболизм джевабыны уйдурувда насыл роль ойнай ве насыл метаболитлер къорчалавнынъ тюр спецификасына иссе къошалар? (Iv) Бир чокъ къорчалав назариелери япкъан тахминлерни биологик токъумаларнынъ бутюн севиелери боюнджа кенишлетмек мумкюн олгъанындан, биз ички тенъештирювден тюрлерара тенъештирювге къадар себеп олгъан метаболизм джевабы не къадар изчен олгъаныны сорадыкъ? Бунынъ ичюн биз тютюн никотинининъ япракъ метаболомыны систематик суретте огрендик, о, зенгин ихтисаслашкъан метаболизмге малик экологик нумюневий осюмликтир, эки ерли от ашагъан айванларнынъ личинкаларына къаршы тесирлидир, Lepidoptera Datura (Ms) ( Пек агрессив, эсасен ашала) On Solanaceae of kindliton areliteras a), Solanaceae of kindliton areS a). «сой», Solanaceae ве башкъа сой ве къоранталарнынъ дигер эв саиплери олгъан осюмликлернен Осюмликлернинъ гъыдасы. Биз МС/МС метаболомика спектрини талиль эттик ве ОД ве МТ назариелери тенъештирмек ичюн малюмат назариеси статистик дескрипторларыны чыкъардыкъ. Эсас метаболитлернинъ айнылыгъыны ачыкъламакъ ичюн спецификлик хариталарыны япынъыз. Талиль N. nasi ве якъын сойдаш тютюн чешитлерининъ догъма популяциясына кенишлетильди, осюмлик гормон сигнал берюв ве ОД индукциясы арасындаки ковариантны даа да талиль этмек ичюн.
От ашагъан тютюннинъ япракъ метаболомынынъ пластичности ве къурулышы акъкъында умумий хаританы алмакъ ичюн, биз эвельден ишлеп чыкъарылгъан талиль ве эсаплав иш акъымы ярдымынен осюмлик экстрактларындан мустакъиль МС/МС спектрлерини юксек ифадели малюматны эр тарафлама топладыкъ ве деконволюция эттик ( 9). Бу дифференциацияланмагъан усул (МС/МС деп адландырыла) артыкъча олмагъан муреккеп спектрлерни къурып олур, оларны сонъра мында тасвирленген бутюн муреккеп севиедеки анализлер ичюн къулланмакъ мумкюн. Бу деконволюциялангъан осюмлик метаболитлери чешит тюрлю олып, юзлернен бинълернен метаболитлерден ибареттир (мында 500-1000-с/МС/МС якъын). Мында биз метаболизмнинъ пластикасыны малюмат назариеси черчивесинде бакъып чыкъамыз, ве метаболизмнинъ сыкълыкъ пайлашувынынъ Шеннон энтропиясына эсасланып, метаболизмнинъ чешитлигини ве профессионализмини микъдарджа эсаплаймыз. Эвельден амельге кечирильген (8) формуланы къулланып, биз метаболом чешитлигини (Hj косьтергичи), метаболизм профилининъ ихтисаслашувыны (δj косьтергичи) ве бир метаболитнинъ метаболизм спецификлигини (Si косьтергичи) микъдарджа эсапламакъ ичюн къулланмакъ мумкюн олгъан косьтергичлернинъ бир сырасыны эсапладыкъ . Бундан гъайры, биз от ашагъан айванларнынъ метаболом индукцияланувыны микъдарджа эсапламакъ ичюн нисбий месафе пластичность индексини (НДПИ) къулландыкъ (1А рес.) (30). Бу статистик черчиведе биз МС/МС спектрини эсас малюмат бирлеми оларакъ бакъамыз, ве МС/МСнинъ нисбий боллугъыны сыкълыкъ пайлашув харитасына ишлеймиз, сонъра исе ондан метаболом чешитлигини къыймет кесмек ичюн Шеннон энтропиясыны къулланамыз. Метаболомнынъ ихтисаслашмасы бир МС/МС спектрининъ орта спецификлигинен ольчениле. Демек, от ашагъан айванларнынъ индукциясындан сонъ базы МС/МС сыныфларынынъ чокълугъынынъ артмасы спектраль индукциягъа, РДПИге ве ихтисаслашувгъа, яни δj индексининъ артмасына чевириле, чюнки даа ихтисаслашкъан метаболитлер мейдангъа келе ве юксек Si индекси мейдангъа келе. Hj чешитлик индексининъ тюшюви я мейдангъа кельген МС/МС сайысы эксильгенини, я да профиль сыкълыкъ пайлашмасы азджа бир тюрлю ёнелиште денъишкенини, айны вакъытта онынъ умумий беллисизлигини эксильткенини акс эте. Si индексининъ эсабы вастасынен белли бир от ашайджылар тарафындан анги МС/МС индукциялангъаныны, аксине, анги МС/МС индукциягъа джевап бермегенини айрыджа къайд этмек мумкюн, бу исе МТ ве ОД прогнозыны айырмакъ ичюн эсас косьтергичтир.
А) От ашагъан (Н1 ден Нх гедже) МС/МС малюмат индукциясы (РДПИ), чешитлик (Hj индекси), ихтисаслашув (δj индекси) ве метаболитлернинъ спецификлиги (Si индекси) ичюн къулланылгъан статистик дескрипторлар. Ихтисаслашув дереджесининъ артмасы (δj) орта эсапнен от ашагъан специфик метаболитлернинъ даа чокъ мейдангъа келеджегини, чешитликнинъ эксильмеси (Hj) исе метаболитлернинъ мейдангъа келювининъ эксильгенини я да метаболитлернинъ таркъалув харитасында тенъсиз пайлашкъаныны косьтере . Si къыймети метаболитнинъ белли бир вазиетке хас олгъаныны (мында от ашагъан) я да аксине айны севиеде сакълангъаныны къыймет кесе. Б) Информацион назариенинъ кошеси ярдымынен мудафаа назариеси тахминининъ къаврайыш схемасы. ОД назариеси от ашагъан айванларнынъ уджюми мудафаа метаболитлерини арттырыр, ве бунынънен δj арттырыр, деп тахмин эте. Айны вакъытта Hj эксиле, чюнки профиль метаболизм малюматынынъ эксильген беллисизлигине догъру янъыдан тешкиль этиле. МТ назариеси от ашагъан айванларнынъ уджюми метаболомда ёнелишсиз денъишмелернинъ пейда оладжагъыны, бунынънен метаболизм малюматынынъ беллисизлигининъ арткъан косьтергичи оларакъ Hj арттырыладжагъыны ве Si нинъ тасадифий даркъалувына себеп оладжагъыны тахмин эте. Биз де къарышыкъ моделни, энъ яхшы МТ-ни теклиф эттик, онда къорчалав къыйметлери зияде олгъан базы метаболитлер айрыджа арттырыладжакъ (Si къыймети юксек), дигерлери исе тасадифий джеваплар косьтерир (Si къыймети алчакъ).
Информацион назариенинъ дескрипторларыны къулланып, биз ОД назариеси бойле талиль этемиз: от ашайджылар тарафындан индукцияланмагъан конститутив алында махсус метаболитлернинъ денъишмелери (i) метаболизм спецификасынынъ артмасына (Si индекси) метабономик спецификликни идаре этеджек (δj индекси) метаболомик спецификликнинъ артмасына (δj индекси) артмасы) белли бир махсус метаболит группаларынынъ диверсификациясыj ( дефенсиH къыймети зияде олгъан) индекс) метаболизм сыкълыгъы пайлашувынынъ беденнинъ даа чокъ лептин пайлашувына денъишмеси себебинден пейда ола. Бир метаболит севиесинде тертипли Si пайлашмасы беклене, мында метаболит озь къорчалав къыйметине коре Si къыйметини арттырыр (1, В рес.). Бу сатыр боюнджа биз къозгъалув (i) метаболитлерде δj индексининъ эксильмесине кетирген ёнелишсиз денъишмелерге ве (ii) метаболизмнинъ беллисизлигининъ артмасы себебинден Hj индексининъ артмасына кетиреджегини тахмин этмек ичюн анълатамыз. Я да умумийлештирильген чешитлик шеклинде Шеннон энтропиясы иле микъдарджа эсапламакъ мумкюн олгъан тасадифийлик. Метаболизм теркибине кельгенде, МТ назариеси Si нинъ тасадифий пайлашувыны тахмин этеджек. Белли бир метаболитлернинъ белли бир шараитлерде белли бир шараитлерде олгъаныны, дигер шараитлернинъ исе белли бир шараитлерде олмагъаныны, оларнынъ къорчалав къыймети этраф муитке багълы олгъаныны да козь огюне алып, биз де къарышыкъ къорчалав моделини теклиф эттик, онда δj ве Hj Si боюнджа экиге болюнелер. таркъалувы (1, В рес.).
Янъыдан бельгиленген мудафаа назариеси тахминини малюмат назариеси дескрипторынынъ кошеси узеринде сынамакъ ичюн биз Nepenthes pallens япракъларында эксперт (Мс) я да умумий (Сл) от ашагъан личинкаларны осьтюрдик (2А рес.). МС/МС анализини къулланып, биз тыртырлар ашаткъан сонъ топлангъан япракъ токъумасынынъ метанол экстрактларындан 599 артыкъча олмагъан МС/МС спектрини (S1 малюмат файлы) чыкъардыкъ. RDPI, Hj ве δj индекслерини къулланып, MS/MS конфигурация файлларында малюмат мундериджесининъ янъыдан конфигурациясыны корьгезмек меракълы шекиллерни ачыкълай (2В рес.). Умумий тенденция шунда ки, малюмат дескрипторы тасвирлегени киби, тыртырлар япракъ ашамагъа девам эттилер, вакъыт кечтикче бутюн метаболизмнинъ янъыдан тешкиль этильмеси дереджеси арта: от ашагъан айван ашагъан сонъ 72 саат кечкен сонъ, РДПИ эп арта. Зарарланмагъан контрольнен тенъештирильгенде, Hj эп эксильди, бу исе δj индекси иле микъдарджа эсаплангъан метаболизм профилининъ ихтисаслашув дереджесининъ артмасынен багълы эди. Бу корюнген тенденция ОД назариеси тахминлерине келише, амма метаболит севиелериндеки тасадифий (ёнелишсиз) денъишмелер къорчалав камуфляжы оларакъ къулланылгъаныны тюшюнген МТ назариеси эсас тахминлерине келишмей (1В рес.). Бу эки от ашагъан айваннынъ агъыз секрециясы (ОС) элициторынынъ мундериджеси ве гъыдаланув арекетлери фаркълы олса да, оларнынъ догърудан-догъру гъыдаланувы 24 саат ве 72 саатлыкъ джыйма девирлеринде Hj ве δj ёнелишлеринде бойле денъишмелернинъ пейда олувына кетире эди. Тек фаркъ РДПИнинъ 72 саатинде пейда олды. Мс гъыдаланувындан пейда олгъанына коре, Sl гъыдаланувындан пейда олгъан умумий метаболизм зияде олды.
(А) Эксперименталь лейха: умумий домуз (S1) я да эксперт (Ms) от ашагъанлар чанакъ осюмликлерининъ тузсызландырылгъан япракъларынен бесленелер, импульс от ашагъанлар ичюн исе стандартлаштырылгъан япракъ ерлешюв ярасынынъ тешильмесини алып бармакъ ичюн Ms (W + OSMs) ОС къулланыла. S1 (W + OSSl) личинкалары я да сув (W + W). Незарет (С) — зарарланмагъан япракъ. Б) махсус метаболит харитасы ичюн эсаплангъан индукцияланув (незарет диаграммасынен тенъештирильген РДПИ), чешитлик (Hj индекси) ве ихтисаслашув (δj индекси) индекси (599 МС/МС; S1 малюмат файлы). Йылдызчыкълар догърудан-догъру от ашагъан айванларнынъ гъыдаланувы ве идаре группасы арасында эмиетли фаркъларны косьтере (Студентнинъ t-тести чифт t-тестинен, *Р<0,05 ве ***Р<0,001). нс, муим дегиль. В) импульсли от ашайджыларнен тедавийленген сонъ эсас (мавы къуту, аминокислота, органик кислота ве шекер; малюмат файлы S2) ве махсус метаболит спектрининъ (къырмызы къуту 443 МС/МС; малюмат файлы S1) вакъыт чешитлиги индекси. Ренък лентасы 95% ишанч аралыгъыны бильдире. Йылдызчыкъ тедавийлев ве идаре арасындаки эмиетли фаркъны косьтере [дисперсиянынъ квадрат талили (АНОВА), онынъ артындан пост хок чокъ къыяславлар ичюн Тукейнинъ намуслы эмиетли фаркъы (НЭФ), *Р<0,05, **Р<0,01 Ве *** Р <0,001]. Г) даркъалув графиклерининъ ве махсус метаболит профильлерининъ ихтисаслаштырылмасы (чешит ишлевлернен текрарлангъан нумюнелер).
Метаболом севиесинде от ашайджылар тарафындан мейдангъа кетирильген ремоделирование айры метаболитлер севиесиндеки денъишмелерде акс олунамы, ёкъмы, тешкермек ичюн биз башта от ашайджыларгъа исбатлангъан къаршылыкъ косьтерген Nepenthes pallens япракъларында эвельден огренильген метаболитлерге дикъкъат айырдыкъ. Фенол амидлери — бу боджеклернинъ от ашамакъ джерьянында топлангъан ве боджеклернинъ чалышувыны эксильткенлери белли олгъан гидроксициннамамид-полиамин конъюгатларыдыр (32). Биз уйгъун МС/МСнинъ прекурсорларыны араштырдыкъ ве оларнынъ кумулятив кинетик эгрилерини сыздыкъ (С1 рес.). Аджаип дегиль, от ашагъан айванлардан къорчаланувда догърудан-догъру иштирак этмеген фенол алынмалары, меселя, хлороген кислотасы (ХКК) ве рутин от ашагъан сонъ ашагъы низамлана. Аксине, от ашагъан айванлар фенол амидлерини юксек кучьлю япып олурлар. Эки от ашагъан айваннынъ токътамайып гъыдаланмасы феноламидлернинъ къозгъалув спектрининъ деерлик бирлигини мейдангъа кетире ве бу шекиль хусусан феноламидлернинъ де ново синтези ичюн ачыкъ корюне эди. Айны адисе 17-гидроксигеранил нонанедиол дитерпен гликозидлери (17-HGL-DTGs) ёлуны араштыргъанда да козьге чарпаджакъ, о, от ашагъанларгъа къаршы эффектив функцияларгъа малик олгъан чокъ сайыда ациклик дитерпенлерни чыкъара (33), олардан Ms Feeding profiled aFigure Sl трипрессиясынен).
От ашагъанларнынъ догърудан-догъру гъыдаланув теджрибелерининъ ола бильген эксиклиги – от ашагъанларнынъ япракъ ашамакъ тезлиги ве гъыдаланув вакъытынынъ фаркъыдыр, бу исе яралар ве от ашагъанларнынъ от ашагъанларгъа хас тесирлерни ёкъ этмеге къыйынлаштыра. Индукциялангъан япракъ метаболизм джевабынынъ от ашагъан тюрлернинъ спецификасыны даа яхшы чезмек ичюн, биз янъы топлангъан ОС (ОСМ ве ОСС1) япракъларнынъ изчен ерлешювининъ стандарт пункция W устюне деръал къойып, Ms ве Sl личинкаларынынъ гъыдаланувыны импульслендирдик. Бу процедурагъа W + OS тедавийлеви дейлер ве о, токъума джоюлувынынъ сурьаты я да микъдарындаки фаркъларнынъ къарыштырув тесирлерини догъурмайып, от ашагъан айван тарафындан чыкъарылгъан джевапнынъ башланувыны догъру вакъыткъа къойып, индукцияны стандартлаштыра (2А рес.) (34). МС/МС талиль ве эсаплав бору ёлуны къулланып, биз 443 МС/МС спектрини (S1 малюмат файлы) чыкъардыкъ, олар эвель догърудан-догъру беслев теджрибелеринден топлангъан спектрлернен къапланды. Бу МС/МС малюматлар топламынынъ малюмат назариеси талили шуны косьтере ки, от ашагъан айванларны импульслемек ёлунен япракъларгъа ихтисаслашкъан метаболомларнынъ янъыдан программаланмасы ОС-ке хас индукцияларны косьтере (2С рес.). Хусусан, ОСС1 тедавийлевинен тенъештирильгенде, ОСМ 4 саатте метаболом ихтисаслашувынынъ къуветлешмесине себеп олды. Къайд этмеге ляйыкътыр ки, догърудан-догъру от ашайджыларнынъ гъыдаланув эксперименталь малюмат топламынен тенъештирильгенде, координаталар оларакъ Hj ве δj къулланып, эки ольчюли бошлукъта корьгезильген метаболизм кинетикасы ве от ашайджыларнынъ импульсли тедавийлевине джевап оларакъ метаболом ихтисаслашувынынъ ёнелишлилиги вакъыт кечтикче Арта изчен (2D рес.). Айны вакъытта, биз аминокислота, органик кислота ве шекерлернинъ микъдарыны микъдарджа эсапладыкъ (S2 малюмат файлы), метаболом экспертизасынынъ бу макъсатлы артмасы импульс от ашагъан айванларгъа джевап оларакъ меркезий углерод метаболизмининъ янъыдан конфигурациясынен багълы олгъаныны тешкермек ичюн ( S2 рес.). Бу шекильни даа яхшы анълатмакъ ичюн биз эвельден музакере этильген феноламид ве 17-ГГЛ-ДТГ ёлларынынъ метаболизм топланув кинетикасыны даа да зияде козеттик. От ашагъан айванларнынъ ОС-ке хас индукциясы феноламид метаболизми ичинде дифференциаль янъыдан ерлештирюв шекилине чевириле (С3 рес.). Кумарин ве кофеоил къысымлары олгъан фенол амидлери ОСС1 тарафындан энъ зияде индукциялана, ОСМлер исе ферулил конъюгатларынынъ специфик индукциясыны къозгъайлар. 17-ГГЛ-ДТГ ёлу ичюн ашагъы акъынтыдаки малонилляция ве дималониляция махсулатлары ярдымынен дифференциаль ОС индукциясы тапылды (С3 рес.).
Сонъра биз ОС-индукциялангъан транскриптома пластикасыны от ашагъан айванларда розетка осюмлиги япракъларынынъ япракъларыны тедавийлемек ичюн ОСМ-лернинъ къулланылувыны импульслеген вакъыт кечюв микромассив малюмат топламы ярдымынен огрендик. Орнек алув кинетикасы эсас оларакъ бу метаболомика огренювинде къулланылгъан кинетиканен уйгъун келе (35). Метаболом реконфигурациясынен тенъештирильгенде, анда метаболизм пластичности хусусан вакъыт кечтикче артты, биз Мс тарафындан индукциялангъан япракъларда кечиджи транскрипция патлавларыны козетемиз, мында транскриптома индукциясы (РДПИ) ве ихтисаслашув (δj) 1 ердедир. транскриптома ихтисаслашувынынъ (С4 рес.). Метаболизм ген къоранталары (Р450, гликозилтрансфераза ве БАХД ацилтрансфераза киби) юкъарыда анъылгъан эрте юксек ихтисаслашув моделине риает этип, биринджи метаболизмден алынгъан къурулыш бирлемлеринден махсус метаболитлерни джыйув джерьянында иштирак этелер. Мисал оларакъ фенилаланин ёлу талиль этильди. Талиль феноламидлернинъ метаболизминдеки ядро ​​генлери от ашагъан айванларда озьлерине джельп этильмеген осюмликлерге коре юксек дереджеде ОС-индукциялангъаныны ве оларнынъ экспрессия шекиллеринде якъын ерлешкенини тасдыкълады. Бу ёлнынъ юкъарыдаки MYB8 транскрипция факторы ве PAL1, PAL2, C4H ве 4CL къурулыш генлери транскрипциянынъ эрте башлангъаныны косьтере эдилер. Феноламиднинъ сонъки джыйылувында роль ойнагъан АТ1, ДХ29 ве СВ86 киби ацилтрансферазалар узун вакъыт девамында юксельтильген низамланув шекилини косьтере (С4 рес.). Юкъарыдаки козетювлер транскриптома ихтисаслашувынынъ эрте башланувы ве метаболомика ихтисаслашувынынъ сонъраки къуветлештирильмеси бирлешкен режим олгъаныны косьтере, бу исе кучьлю къорчалав джевабыны башлагъан синхрон низамлайыджы системанен багълы ола биле.
Осюмликлернинъ гормон сигнал берювиндеки реконфигурация осюмликлернинъ физиологиясыны янъыдан программаламакъ ичюн от ашагъан малюматны бирлештирген низамлайыджы къатлам вазифесини беджере. От ашагъан айванларнынъ импульсини импульслендирген сонъ, биз осюмликлернинъ эсас гормон категорияларынынъ кумулятив динамикасыны ольчедик ве оларнынъ арасындаки вакъыт коэкспрессиясыны корьгездик [Пирсон корреляция коэффициенти (ПКК)> 0,4] (3А рес.). Бекленильгени киби, биосинтезнен багълы осюмлик гормонлары осюмлик гормонларынынъ коэкспрессия агъында багълана. Бундан гъайры, чешит тедавийлер иле индюкация этильген осюмлик гормонларыны айдынлатмакъ ичюн бу агъгъа метаболизм спецификасы (Si индекси) хариталана. От ашагъанларнынъ специфик джевабынынъ эки эсас саасы сызыла: бириси JA кластеринде, мында JA (онынъ биологик фааль шекли JA-Ile) ве дигер JA алынмалары энъ юксек Si баллыны косьтере; дигери исе этилен (ЭТ) ола. Гиббереллин от ашагъанларгъа спецификликнинъ тек орта дереджеде арткъаныны косьтере, цитокинин, ауксин ве абсцис кислотасы киби дигер осюмлик гормонлары исе от ашагъанларгъа алчакъ индукция спецификлигини косьтере. Ялынъыз W + W къулланувнен тенъештирильгенде, ОС къулланмасы (W + OS) вастасынен JA алынмаларынынъ энъ юксек къыйметининъ къуветлештирильмеси эсас оларакъ JA-ларнынъ кучьлю специфик косьтергичине чевириле биле. Бекленильмеген алда, фаркълы элицитор мундериджеси олгъан ОСМ ве ОСС1 JA ве JA-Ile нинъ бойле топланувына себеп олгъаны беллидир. ОСС1-ден фаркълы оларакъ, ОСМ ОСМлер тарафындан специфик ве кучьлю индукциялана, ОСС1 исе базаль яраларнынъ джевабыны къуветлештирмей (3В рес.).
А) От ашайджылар тарафындан мейдангъа кетирильген осюмлик гормонларынынъ топланув кинетикасы импульсининъ ПКК эсабына эсаслангъан коэкспрессия агъынынъ талили. Тюйюм бир осюмлик гормоныны, тююмнинъ колеми исе тедавийлер арасында осюмлик гормонына хас олгъан Si индексини ифаде эте. Б) япракъларда JA, JA-Ile ве ET топланмасы чешит ренклернен косьтерильген чешит ишлевлернинъ себебинден пейда ола: эрик, W + OSM; мавы, В + ОССл; къара, В + В; боз, С (незарет) . Йылдызчыкълар тедавийлев ве идаре арасында эмиетли фаркъларны косьтере (эки тарафлы АНОВА, онынъ артындан Tukey HSD post hoc чокътан-чокъ тенъештирюв, *** Р <0,001). JA биосинтезинде (С)697 МС/МС (малюмат файлы S1) JA биосинтезинде ве бозулгъан къабул спектринде (irAOC ве irCOI1) ве (D)585 MS/MS (малюмат файлы S1) ЭТ сигналы бозулгъан ЭТР1-де малюмат назариеси талили Эки импульсли от ашайджыларнынъ идаре этюв планы ве векле емп. Йылдызчыкълар W+OS тедавийлеви ве зарарланмагъан контроль арасында эмиетли фаркъларны косьтере (эки тарафлы АНОВА, онынъ артындан Tukey HSD post hoc чокътан-чокъ тенъештирюв, *Р<0,05, **Р<0,01 ве ***Р<0,001). Д) Ихтисаслашувгъа къаршы даркъалгъан къаршылыкънынъ даркъалгъан графиклери. Ренъклер чешит генетик джеэттен денъиштирильген штаммларны ифаде этелер; ишаретлер чешит тедавийлев усулларыны косьтере: учькошелик, W + OSS1; тюзкошелик, В + ОСМ; даире С .
Сонъра биз JA ве ET биосинтезининъ (irAOC ве irACO) ве къабул этювнинъ (irCOI1 ве sETR1) эсас адымларында генетик джеэттен денъиштирильген зайыфлаштырылгъан Nepenthes (irCOI1 ве sETR1) штаммыны къулланып, бу эки осюмлик гормонларынынъ от ашагъан айванларнынъ гъайрыдан программалаштырув иссеси узериндеки метаболизмини талиль этемиз The relative. Эвельки теджрибелерге мувафыкъ оларакъ, биз бош ташыйыджы (ЭТ) осюмликлерде от ашайджы-ОС индукциясыны (3 рес., С-ден Д-ге къадар) ве ОСМ себебинден Hj индексининъ умумий эксильмесини, δj индекси исе арткъаныны тасдыкъладыкъ. Джевап ОСС1 тарафындан къозгъалгъан джеваптан даа ачыкъ корюне. Координаталар оларакъ Hj ве δj къулланылгъан эки сызыкълы графикте специфик дерегулирование косьтериле (3Е рес.). Энъ ачыкъ тенденция шунда ки, JA сигналы олмагъан штаммларда от ашагъан айванларнынъ метаболом чешитлиги ве ихтисаслашув денъишмелери деерлик бутюнлей ёкъ этиле (3С рес.). Аксине, sETR1 осюмликлеринде сессиз ЭТ къабулы, от ашагъан айванларнынъ метаболизминдеки денъишмелерге умумий тесири JA сигнал берювинден чокъ алчакъ олса да, OSM ве OSS1 къозгъалышлары арасында Hj ве δj индекслерининъ фаркъыны зайыфлата (3D рес. ве S5 рес.). . Бу, JA сигнал трансдукциясынынъ эсас функциясындан гъайры, ET сигнал трансдукциясы от ашагъан айванларнынъ тюрге хас метаболизм джевабыны да инджеден тюзетюв вазифесини беджергенини косьтере. Бу индже тюзетюв функциясына мувафыкъ оларакъ, sETR1 осюмликлеринде умумий метаболом индукциясында денъишюв олмады. Дигер тарафтан, sETR1 осюмликлеринен тенъештирильгенде, irACO осюмликлери от ашагъан айванларнынъ себебинден пейда олгъан метаболизм денъишмелерининъ умумий амплитудаларыны якъынлаштырдылар, амма OSM ве OSS1 чагъырувлары арасында Hj ве δj баллларыны эмиетли дереджеде фаркълы косьтердилер (S5 рес.).
От ашагъан айванларнынъ тюрлерге хас джевабына муим иссе къошкъан махсус метаболитлерни бельгилемек ве оларнынъ мейдангъа кетирильмесини ЭТ сигналлары вастасынен инджеден уйдурмакъ ичюн биз эвельден ишлеп чыкъарылгъан структурлы МС/МС усулыны къулландыкъ. Бу усул МС/МС фрагментлеринден [нормаллештирильген нокъта махсулаты (НДП)] ве нейтраль джоюмгъа (НЛ) эсаслангъан бенъзешюв баллындан метаболизм къорантасыны янъыдан чыкъармакъ ичюн эки кластерлештирюв усулына эсаслана. ЭТ трансген сызыкъларынынъ талили вастасынен къурулгъан МС/МС малюмат топламы 585 МС/МС (малюмат файлы S1) чыкъарды, бу оларны еди эсас МС/МС модульге (М) кластерлештирюв ёлунен чезильди (4А рес.) . Бу модульлернинъ базылары эвельден характеристика берильген махсус метаболитлернен сыкъ-сыкъ толдурылгъан: меселя, М1, М2, М3, М4 ве М7 чешит фенол алынмалары (М1), флавоноид гликозидлери (М2), ацил шекерлери (М3 Ве М4), 17-ГГЛ-ДТГ (М7) иле зенгиндир. Бундан да гъайры, эр бир модульдеки бир метаболитнинъ метаболизмге хас малюмат (Si индекси) эсаплана ве онынъ Si пайлашувыны интуитив шекильде корьмек мумкюн. Къыскъадан айткъанда, юксек от ашайджылыкъ ве генотип спецификлигини косьтерген МС/МС спектрлери юксек Si къыйметлеринен характерлене, куртоз статистикасы исе къуйрукънынъ сагъ кошесинде тюкнинъ даркъалувыны косьтере. Бойле арыкъ коллоид пайлашувларындан бири М1-де тапылды, анда фенол амид энъ юксек Si фракциясыны косьтере (4, В рес.). М7-де эвельден айтылгъан от ашагъан индукциялангъан 17-HGL-DTG орта Si баллыны косьтере, бу исе эки ОС чешити арасында орта дереджеде дифференциаль низамланувны косьтере. Аксине, рутин, СГА ве ацил шекерлери киби конститутив шекильде чыкъарылгъан махсус метаболитлернинъ чокъусы энъ алчакъ Si балллары арасындадыр. Махсус метаболитлер арасындаки къурулыш муреккеплигини ве Si пайлашувыны даа яхшы огренмек ичюн эр бир модуль ичюн молекуляр агъ къурулды (4, В рес.). ОД назариеси муим бир тахмин (1В ресимде умумийлештирильген) шунда ки, от ашагъан сонъ махсус метаболитлернинъ янъыдан тешкиль этильмеси юксек къорчалав къыйметине малик метаболитлерде бир тарафлы денъишмелерге кетирмек керек, хусусан оларнынъ спецификлигини арттырув ёлунен (тасадифий даркъалувдан фаркълы оларакъ) Режим) МТ назариеси тарафындан тахмин этильген къорчалав метаболити. М1-де топлангъан фенол алынмаларынынъ чокъусы функциональ джеэттен боджеклернинъ чалышув джерьянынынъ эксильмесинен багълыдыр (32). саатте ЭВ идаре осюмликлерининъ индукциялангъан япракълары ве теркибий япракълары арасында М1 метаболитлериндеки Si къыйметлерини тенъештиргенде, от ашагъан боджеклерден сонъ бир чокъ метаболитлернинъ метаболизм спецификасы эмиетли артув тенденциясына малик олгъаныны козьде туттыкъ (4С рес.). Si къыйметининъ специфик артмасы тек къорчалав феноламидлеринде тапылды, амма бу модульде берабер яшагъан башкъа фенолларда ве белли олмагъан метаболитлерде Si къыйметининъ артмасы тапылмады. Бу махсуслаштырылгъан модельдир, о ОД назариесинен багълыдыр. От ашагъан айванларнынъ метаболизм денъишмелери акъкъында эсас тахминлер бир-бирине уйгъун келе. Феноламид спектрининъ бу хусусиетлиги ОС-специфик ЭТ тарафындан индукциялангъаныны тешкермек ичюн биз метаболит Si индексини сыздыкъ ве EV ве sETR1 генотиплеринде OSM ве OSS1 арасында дифференциаль экспрессия къыйметини догъурдыкъ (4D рес.). sETR1-де ОСМ ве ОСС1 арасында фенамидлернинъ мейдангъа кетирген фаркъы чокъ эксильди. Эки кластерлештирюв усулы JA-нен низамлангъан метаболизм ихтисаслашувынен багълы эсас MS/MS модульлерини чыкъармакъ ичюн JA етишмеген штаммларда топлангъан MS/MS малюматларына да къулланылды (S6 рес.).
(А) 585 МС/МСнинъ ортакъ фрагментке (НДП бенъзешмеси) ве ортакъ нейтраль джоюмгъа (НЛ бенъзешмеси) эсаслангъан кластерлештирюв нетиджелери модульнинъ (М) белли бирикме къорантасынен, я да белли олмагъан я да зайыф метаболизленген Метаболит теркибинен келишкенини косьтере. Эр бир модульнинъ янында метаболитнинъ (МС/МС) хас (Si) пайлашмасы косьтериле. Б) Модуль молекуляр агъ: Тюйюмчиклер МС/МС ве четлерни, НДП (къырмызы) ве НЛ (мавы) МС/МС баллларыны косьтере (кесик,> 0,6). Модульге эсасланып ренкленген ве молекуляр агъгъа (сагъда) хариталангъан градациялы метаболитлернинъ спецификлиги индекси (Si). В) 24 саат ичинде конститутив (незарет) ве индукциялангъан алында (импуляциялы от ашагъан) ЭВ осюмлигининъ М1 модули: молекуляр агъ схемасы (Si къыймети – тююмнинъ колеми, къорчалав феноламид мавы ренкнен айдынлатылгъан). (Г) ЭВ ве ЭТ къабулы бозулгъан sETR1 спектр сызыгъынынъ М1 молекуляр агъ схемасы: ешиль даире тююми иле ифаделенген фенол бирикмеси, ве Тюйюмнинъ колеми оларакъ W + OSM ве W + OSS1 тедавийлевлери арасындаки эмиетли фаркъ (Р къыймети). СП, N-кофеоил-тирозиннинъ; КС, Н-кофеоил-спермидиннинъ; ФП, N-ферул кислотасы эфир-сидик кислотасы; ФС, Н-ферулил-спермидиннинъ; КоП, Н’, Н «-Кумаролил-тирозин;ДКС, Н’, Н»-дикафеоил-спермидин; КФС, N’, N”-кофеоил, ферулоил-спермидин;Къашкъыр джилектеки лиций барбарум Сон;Ник.О-АС, О-ацил шекери.
Биз талильни даа бир зайыфлаштырылгъан Nepenthes генотипинден табиий популяцияларгъа кенишлеттик, мында от ашагъан JA севиелеринде ве специфик метаболит севиелеринде кучьлю тюр ичиндеки денъишмелер табиий популяцияларда эвельден тасвирленген эди (26). Бу малюмат топламыны къулланып, 43 джермплазманы къапла. Бу джермплазмалар N. pallens осюмликлеринден 123 чешит осюмликтен ибарет. Бу осюмликлер Юта, Невада, Аризона ве Калифорния штатларында чешит ерли яшагъан ерлерде топлангъан урлукълардан алынды (S7 рес.), биз метаболом чешитлигини (мында популяция севиеси деп адландырыла) β чешитлигини) ве ОСМнинъ себебинден пейда олгъан ихтисаслашувны эсапладыкъ. Эвельки араштырмаларгъа мувафыкъ оларакъ, биз Hj ве δj кошелери боюнджа метаболизм денъишмелерининъ кенъ диапазоныны козьде туттыкъ, бу исе джермплазмаларнынъ от ашагъан айванларгъа метаболизм джевапларынынъ пластикасында эмиетли фаркълар олгъаныны косьтере (S7 рес.). Бу тешкилят от ашагъан айванларнынъ себебинден пейда олгъан ДжА денъишмелерининъ динамик диапазоны акъкъында эвельки козетювлерни хатырлата ве бир популяцияда пек юксек къыйметни сакълап къалды (26, 36). Hj ве δj арасындаки умумий севие корреляциясыны тешкермек ичюн JA ве JA-Ile къулланып, биз JA ве метаболом β чешитлиги ве ихтисаслашув индекси арасында эмиетли мусбет корреляция олгъаныны таптыкъ (S7 рес.). Бу, популяция севиесинде тапылгъан JAs индукциясында от ашагъанлар тарафындан мейдангъа кетирильген гетерогенлик боджек от ашагъанлардан сечип алувдан пейда олгъан эсас метаболизм полиморфизмлеринен багълы ола биледжегини косьтере.
Эвельки араштырмалар тютюннинъ чешитлери индукциялангъан ве конститутив метаболизм къорчалавларына чешит ве нисбий багълылыкъ джеэтинден чокъ фаркълангъаныны косьтере эдилер. От ашагъанларгъа къаршы сигнал трансдукциясында ве къорчаланув къабилиетлериндеки бу денъишмелер белли бир тюрнинъ оськен нишасында боджеклернинъ популяция басымы, осюмликлернинъ омюр девирлери ве къорчаланув истисал масрафларынен идаре этиле, деп саялар. Биз Шималий Америка ве Дженюбий Америкада догъгъан алты Nicotiana чешитининъ от ашагъан айванлары тарафындан индюкация этильген япракъ метаболомынынъ гъайрыдан шекилленювининъ изченлигини огрендик. Бу тюрлер Непентес Шималий Америка, яни Николас Боцифло иле якъын сойдаштыр. Ла, Н. никотинис, Никотиана н. зайыфлаштырылгъан от, Nicotiana tabacum, сызыкълы тютюн, тютюн (Nicotiana spegazzinii) ве тютюн япракълы тютюн (Nicotiana obtusifolia) (5А рес.) (37). Бу тюрлерден алтысы, шу джумледен яхшы характеристикалангъан N. please тюрлери петуния кладынынъ бир йыллыкъ осюмликлеридир, obtusifolia N. исе къардаш клады Trigonophyllae (38)нинъ чокъ йыллыкъ осюмликлеридир. Сонъра бу еди тюрде W + W, W + OSM ве W + OSS1 индукциясы япылды, бу исе боджеклернинъ гъыдаланувынынъ тюр севиесиндеки метаболизм янъыдан ерлештирильмесини огренмек ичюн япылды.
А) максималь ихтималлыкъкъа [ядролы глутамин синтези ичюн (38)] ве еди якъын сойдаш олгъан Nicotiana чешитининъ (чешит ренклерде) джогърафик даркъалувына эсаслангъан бутстрап филогенетик терек (37). Б) еди Nicotiana чешитининъ метаболизм профили ичюн махсус чешитликнинъ даркъалув графиги (939 MS/MS; S1 малюмат файлы). Тюр севиесинде метаболомнынъ чешитлиги ихтисаслашув дереджесинен менфий корреляциядадыр. Метаболизм чешитлиги ве ихтисаслашув ве JA топланмасы арасындаки тюр севиесиндеки багънынъ талили 2 рес-де косьтерильген.S9. Ренъки, чешит тюрлюлери; учькошелик, В + ОСС1; тюзкошелик, В + ОСМ; (С) Nicotiana JA ве JA-Ile динамикасы ОС къозгъалув амплитудасына коре сыралангъан (эки тарафлы АНОВА ве Tukey HSD чокътан-чокъ тенъештирювден сонъ, * Р <0,05, ** Р <0,01 ве * ** W + OS ве W + W тенъештирюв ичюн, Р <0,001). От ашагъан ве метил JA (MeJA) импульслерини импульслендирген сонъ эр бир тюрнинъ (D) чешитлиги ве (E) ихтисаслашувынынъ къуту графиги. Йылдызчыкъ W + OS ве W + W я да ланолин плюс W (Lan + W) я да Lan плюс MeJA (Lan + MeJa) ве Lan контроль арасындаки эмиетли фаркъны косьтере (дисперсиянынъ эки тарафлы талили, сонъра Тукейнинъ HSD post hoc чокътан-чокъ тенъештирюви , *P<0.05, **P<0.0.1 ве).
Эки кластер усулыны къулланып, 939 МС/МС (S1 малюмат файлы) 9 модульни бельгиледик. Чешит ишлевлернен янъыдан конфигурациялангъан МС/МСнинъ теркиби тюрлер арасында чешит модульлер арасында пек денъише (С8 рес.). Hj (мында тюр севиесиндеки γ-чешитлик деп адландырыла) ве δj ни корьгезмек, чешит тюрлернинъ метаболизм босагъасында пек чешит группаларгъа топлангъаныны косьтере, мында тюр севиесиндеки болюнюв адет узьре къозгъалувдан зияде козьге чарпа. N. linear ве N. obliquus истисна олмагъанда, олар индукция тесирлерининъ кенъ динамик диапазоныны косьтере (5, В рес.). Аксине, N. purpurea ве N. obtusifolia киби тюрлернинъ тедавийлевге метаболизм джевабы азджа ачыкъ корюне, амма метаболомлары чешит тюрлюдир. Индукциялангъан метаболизм джевабынынъ тюрлерге коре пайлашмасы ихтисаслашув ве гамма чешитлиги арасында эмиетли менфий корреляцияны мейдангъа кетирди (ПСК = -0,46, Р = 4,9×10-8). ОС-индукциялангъан JAs севиелериндеки денъишмелер метаболом ихтисаслашмасынен мусбет корреляцияда, эр бир тюрнинъ косьтерген метаболизм гамма чешитлигинен исе менфий корреляциядадыр (5В рес. ве S9 рес.). Шуны къайд этмек керек ки, 5С ресимде лакъырды тилинде «сигнал джевабы» тюрлери деп адландырылгъан Nepenthes нематодалары, Nepenthes nepenthes, Nepenthes acute, Nepenthes attenuated киби тюрлер 30 дакъкъада эмиетли аляметлерни догъурдылар. Якъында ОС-ке хас олгъан JA ве JA-Ile чыкъышлары, Nepenthes дегирменлери, Nepenthes тозлу ве N. obtusifolia киби «сигналгъа джевап бермеген» деп адландырылгъан дигер бактериялар исе тек JA-Ile Edge индукциясыны ич бир тюрлю OS спецификлиги олмадан косьтере (5С рес.). Метаболизм севиесинде, юкъарыда къайд этильгени киби, зайыфлашкъан Непентеслер ичюн сигналгъа джевап берген мадделер ОС спецификлигини косьтере ве δj ни эмиетли дереджеде арттыра, айны вакъытта Hj ни эксильте. Бу ОС-ке хас олгъан праймер эффекти сигнал реактив олмагъан тюрлер оларакъ тасниф этильген тюрлерде тапылмады (5 рес., Д ве Е). ОС-ке хас метаболитлер сигналгъа джевап берген тюрлер арасында зияде пайлашыла ве бу сигнал кластерлери зайыф сигнал джеваплары олгъан тюрлернен топлана, зайыф сигнал джеваплары олгъан тюрлер исе бири-бирине азджа багълылыкъ косьтере (S8 рес.). Бу нетидже ДжА-ларнынъ ОС-ке хас индукциясы ве ашагъы акъынты метаболомнынъ ОС-ке хас реконфигурациясы тюр севиесинде бирлешкенини косьтере.
Сонъра биз осюмликлерни ишлемек ичюн теркибинде метил JA (MeJA) олгъан ланолин пастасыны къулландыкъ, бу къошулувы шекиллери осюмликлернинъ цитоплазмаларында оладжакъ экзоген JA тарафындан къулланылгъан JA нинъ мевджутлыгъынен сынъырлангъаныны тешкермек ичюн. Тез деэстерификация — бу Дж.А. Биз Д.А.-нынъ токътамайып теминленмеси себебинден сигналгъа джевап берген тюрлерден сигналгъа джевап бермеген тюрлерге кет-кете денъишювнинъ айны тенденциясыны таптыкъ (5 рес., Д ве Е). Къыскъадан айткъанда, MeJA иле тедавийлев сызыкълы нематодаларнынъ, N. obliquus, N. aquaticus, N. pallens ве N. mikimotoi метаболомларыны кучьлю шекильде янъыдан программалады, бунынъ нетиджесинде δj эмиетли дереджеде артты, Hj исе эксильди. N. purpurea тек δj арткъаныны косьтере, амма Hj дегиль. Эвельде JA-ларнынъ сонъ дередже алчакъ севиеде топлангъаны косьтерильген N. obtusifolia да метаболомнынъ реконфигурациясы джеэтинден MeJA тедавийлевине зайыф джевап бере. Бу нетиджелер сигналгъа джевап бермеген тюрлерде JA мейдангъа кетирюв я да сигнал трансдукциясы физиологик джеэттен сынъырлангъаныны косьтере. Бу гипотезаны тешкермек ичюн биз W + W, W + OSMs ве W + OSS1 Транскриптома (39) тарафындан индукциялангъан дёрт тюрни (N. pallens, N. mills, N. pink ве N. microphylla) огрендик. Метаболомнынъ гъайрыдан шекилленюв шекилине мувафыкъ оларакъ, тюрлер транскриптома босагъасында яхшы айырылгъанлар, оларнынъ арасында N. attenuated энъ юксек ОС-индукциялангъан РДПИ косьтерди, N. gracilis исе энъ алчакъ (6А рес.). Лякин N. oblonga тарафындан индюкация этильген транскриптома чешитлиги дёрт тюр арасында энъ алчакъ олгъаны тапылды, бу исе N. oblonga нинъ эвель еди тюрде косьтерильген энъ юксек метабономик чешитлигине къаршыдыр. Эвельки араштырмалар, эрте къорчалав сигналларынен багълы генлернинъ бир сырасы, шу джумледен JA сигналлары, Nicotiana тюрлеринде от ашагъанларнен багълы элициторлар тарафындан индюкация этильген эрте къорчалав джевапларынынъ спецификасыны анълата (39). Бу дёрт тюр арасындаки JA сигнал ёлларыны тенъештирмек меракълы бир шекильни косьтере (6, В рес.). Бу ёлдаки генлернинъ чокъусы, меселя, АОС, ОПР3, АСХ ве СОИ1 бу дёрт тюрде нисбетен юксек индукция севиесини косьтере эдилер. Лякин JAR4 адлы анахтар гени JA ни озь биологик фааль шекилине чевире, онынъ транскрипция севиеси исе пек алчакъ, хусусан N. mills, Nepenthes pieris ве N. microphylla махлюкъларында. Бундан да гъайры, N. bifidum махлюкъында тек башкъа АОС генининъ транскрипти тапылмады. Ген экспрессиясындаки бу денъишмелер сигнал анергик тюрлеринде алчакъ JA мейдангъа кетирюв ве N. gracilis индукциясы иле индукциялангъан экстремал фенотиплер ичюн месуль ола биле.
А) От ашайджылыкъ индукциясындан 30 дакъкъа сонъ нумюне алынгъан дёрт якъын сойдаш тютюн чешитининъ эрте транскрипцион джевапларынынъ янъыдан программаланувынынъ малюмат назариеси талили. РДПИ от ашагъан ОС тарафындан индукция этильген япракъларны яра контрольнен тенъештирюв ёлунен эсаплана. Ренъклер чешит тюрлерини, ишаретлер исе чешит тедавийлев усулларыны косьтере. Б) Дёрт тюр арасында JA сигнал ёлларында ген экспрессиясынынъ талили. Къуту графиги янында саделештирильген ДжА ёлу косьтериле. Чешит ренклер чешит ишлев усулларыны косьтере. Йылдызчыкъ W + OS тедавийлеви ве W + W идареси арасында эмиетли фаркъ олгъаныны косьтере (чифт фаркълар ичюн Студентнинъ t-тести ичюн, *Р<0,05, **Р<0,01 ве ***Р<0,001). ОПДА, 12-оксофитодиен кислотасы; ОПК-8: 0,3-оксо-2(2′(Z)-пентенил)-циклопентан-1-октан кислотасы.
Сонъки къысымда биз чешит осюмликлернинъ метаболомынынъ боджек чешитлерине хас олгъан гъайрыдан шекилленюви от ашагъан айванларгъа насыл къаршы турмакъ мумкюн олгъаныны огрендик. Эвельки араштырмаларда Nicotiana сою айрыджа къайд этильген эди. Оларнынъ Мс ве личинкаларгъа къаршы турувлары пек фаркъ эте (40). Мында биз бу модель ве оларнынъ метаболизм пластичности арасындаки багъны огрендик. Юкъарыдаки дёрт тютюн чешитини къулланып, ве от ашайджыларнынъ себебинден пейда олгъан метаболомнынъ чешитлиги ве ихтисаслашмасы ве осюмликлернинъ Ms ве Sl къаршылыгъы арасындаки багъны сынап, биз умумий Sl къаршылыгъыны, чешитлигини ве ихтисаслашувыны таптыкъ. С10). S1 къаршылыгъына кельгенде, эм эвельде эм JA сигнал трансдукция севиелери, эм де метаболом пластичлигини косьтерген зайыфлаштырылгъан N. chinensis, эм де N. gracilis от ашагъан айванларнынъ индукциясына пек фаркълы джевапларгъа малик эдилер, эм де олар да бойле юксек къаршылыкъ косьтердилер. Секс.
Сонъки алтмыш йыл ичинде осюмликлернинъ къорчаланув назариеси назарий темельни темин этти, онынъ эсасында араштырмаджылар осюмликлернинъ ихтисаслашкъан метаболитлерининъ баягъы эволюциясыны ве вазифелерини тахмин эттилер. Бу назариенинъ чокъусы кучьлю хулясаларнынъ нормаль тертибине риает этмейлер (41). Олар айны талиль севиесинде эсас тахминлерни (3) теклиф этелер. Эсас тахминлернинъ сынавлары конкрет назариелерге талиль этмеге имкян бергенде, бу тарла илерилей. Дестек алынъыз, амма башкъаларыны ред этинъиз (42). Онынъ ерине янъы назарие талильнинъ чешит севиелеринде тахминлер япа ве тасвирий муляазаларнынъ янъы къатламыны къоша (42). Лякин функциональ севиеде теклиф этильген эки назарие, МТ ве ОД, от ашагъан айванларнынъ себебинден пейда олгъан махсус метаболизм денъишмелерининъ муим прогнозлары оларакъ къолайлыкънен анълатыла биле: ОД назариеси махсуслашкъан метаболизм «бошлугъында» денъишмелер юксек ёнелишли олгъаныны сая . МТ назариеси бойле сая ки, бу денъишмелер ёнелишсиз ве метаболизм босагъасында тасавурлы ерлешкен оладжакъ, ве олар юксек къорчалав къыйметли метаболитлерге малик олмагъа ынтылалар. ОД ве МТ тахминлерининъ эвельки тешкерювлери априори «мудафаа» бирикмелерининъ тар топламы къулланып сынавдан кечирильди. Бу метаболитлерге эсаслангъан тестлер от ашамакъ вакътында метаболомнынъ янъыдан конфигурациясынынъ дереджесини ве траекториясыны талиль этмек имкяныны четке ташлайлар ве бутюнлей бакъыла бильген эсас прогнозларны талап этмек ичюн изчен статистик черчиведе тестлер кечирмеге имкян бермейлер Осюмликлернинъ метаболомындаки денъишмелерни микъдарджа эсапламакъ. Мында биз эсаплав МС эсасында метаболомикада инновацион технологияны къулландыкъ ве дюнья метаболомика севиесинде теклиф этильген экиси арасындаки фаркъны сынамакъ ичюн малюмат назариеси дескрипторларынынъ умумий валютасында деконволюция МС талилини яптыкъ. Бу назариенинъ эсас тахмини. Информацион назарие бир чокъ сааларда, хусусан биочешитлик ве гъыдалы мадделернинъ акъымынынъ араштырмалары контекстинде къулланылгъан (43). Лякин, биз бильгенимизге коре, бу осюмликлернинъ метаболизм малюмат босагъасыны тасвирлемек ве этраф муитнинъ ишаретлерине джевап оларакъ мувакъкъат метаболизм денъишмелеринен багълы экологик меселелерни чезмек ичюн къулланылгъан биринджи къулланмадыр. Хусусан, бу усулнынъ къабилиети осюмликлернинъ чешитлери ичинде ве олар арасындаки шекиллерни тенъештирмек къабилиетиндедир, от ашагъан айванларнынъ эволюциянынъ чешит севиелеринде чешит тюрлерден тюрлерара макроэволюцион шекиллерге насыл эволюция япкъанларыны тешкермек ичюн. Метаболизм.
Эсас компонент талили (ЭКТ) чокъ денъишмели малюматлар топламыны ольчюликни эксильтюв бошлугъына чевире, шунынъ ичюн малюматнынъ эсас тенденциясыны анълатмакъ мумкюн, шунынъ ичюн о, адет узьре, малюматлар топламыны талиль этмек ичюн араштырма усулы оларакъ къулланыла, меселя, деконволюция метаболом. Лякин ольчюликнинъ эксильмеси малюмат топламындаки малюмат мундериджесининъ бир къысмыны джойыр, ПКА исе экология назариеси ичюн айрыджа актуаль олгъан хусусиетлер акъкъында микъдарий малюматны бере бильмез, меселя: от ашайджылар ихтисаслашкъан сааларда чешитликни (меселя, зенгинлик, даркъалув) Ве боллукъ) метаболитлерни насыл этип янъыдан конфигурация этелер? Къайсы метаболитлер берильген от ашагъан айваннынъ индукциялангъан алынынъ прогнозиаторларыдыр? Спецификлик, чешитлик ве индукцияланув джеэтинден япракъкъа хас метаболит профилининъ малюмат мундериджеси парчалана ве от ашагъан айванларнынъ ашамасы специфик метаболизмни фаальлештире биледжеги тапыла. Биз бекленильмеген алда, амельге кечирильген малюмат назариеси косьтергичлеринде тасвирленгени киби, пейда олгъан метаболизм вазиети эки от ашайджы (гедже бесленген умумий Sl) ве Solanaceae эксперти ханымнынъ уджюмлеринден сонъ буюк бир-бирине малик олгъаныны козьде туттыкъ. ОС-те ягъ экшилиги-аминоэкшилик конъюгаты (ЯЭК) башлайыджысы (31). Стандартлаштырылгъан тешик яраларыны тедавийлемек ичюн от ашагъан ОС къулланып, импульс от ашагъан тедавийлев де бойле тенденцияны косьтере. От ашагъанларнынъ уджюмлерине осюмликлернинъ джевабыны импульслемек ичюн бу стандартлаштырылгъан процедура от ашагъанларнынъ ашамакъ арекетлериндеки денъишмелернинъ себебинден пейда олгъан къарыштырув факторларыны ёкъ эте, олар чешит вакъытларда чешит дереджеде зараргъа кетире (34). ОСМнинъ эсас себеби олгъаны белли олгъан ФАК ОСС1-де ДжАС ве дигер осюмлик гормонларынынъ джевапларыны эксильте, ОСС1 исе юзлернен кере эксильте (31). Лякин ОСС1 ОСМ-ге коре ДЖА топланувынынъ бойле севиелерине себеп олды. Бундан эвель зайыфлаштырылгъан непентелерде JA джевабы ОСМ-ге пек сезиджи олгъаны косьтерильген эди, мында ФАК сувнен 1:1000 ольчюде иритильген олса биле, озь фаалиетини сакълап ола (44). Демек, ОСМ-нен тенъештирильгенде, ОСС1-де ФАК пек алчакъ олса да, о, етерли JA чыкъышыны къозгъамакъ ичюн етерлидир. Эвельки араштырмалар поринге бенъзеген акъсиллер (45) ве олигосахаридлер (46) ОСС1-де осюмликлернинъ къорчалав джевапларыны къозгъамакъ ичюн молекуляр ёллар оларакъ къулланыла биледжегини косьтере эдилер. Лякин шимдики тедкъикъатта козьге чарпкъан ДЖА топланувы ичюн ОСС1-деки бу элициторлар месуль олып олмагъаны даа белли дегиль.
Чешит от ашагъанлар я да экзоген JA я да SA (салицил кислотасы) къулланувындан пейда олгъан дифференциаль метаболизм пармакъ излерини тасвирлеген чалышмалар аз олса да (47), ич кимсе осюмлик отлары агъында от ашагъанларнынъ чешитлерине хас бозулувны ве онынъ специфик метаболизмге тесирини бозмады. шахсий малюматны алмакъ мумкюн. Бу талиль даа бойле тасдыкълады ки, ДжА-лардан гъайры дигер осюмлик гормонларынен ички гормон агъ багъы от ашагъан айванларнынъ себебинден пейда олгъан метаболизмнинъ янъыдан тешкиль этильмесининъ спецификасыны шекиллендире. Хусусан, биз ОСМ иле пейда олгъан ЭТ ОСС1 иле пейда олгъанындан эппейи буюк олгъаныны таптыкъ. Бу режим ОСМ-де даа чокъ ФАС мундериджесине келише, бу исе ЭТ патлавыны къозгъамакъ ичюн зарур ве етерли шарттыр (48). Осюмликлер ве от ашайджылар арасындаки тесирлешюв контекстинде ЭТнинъ осюмликлерге хас метаболит динамикасы узеринде сигнал берюв функциясы даа ер-ерден ола ве тек бир муреккеп группагъа нишанлана. Бундан гъайры, чалышмаларнынъ чокъусында ЭТнинъ низамланувыны огренмек ичюн ЭТнинъ я да онынъ прекурсорларынынъ я да чешит ингибиторларнынъ экзоген къулланылувы къулланылды, оларнынъ арасында бу экзоген химиявий къулланмалар чокъ специфик олмагъан ян тесирлерни мейдангъа кетиреджек. Бизим бильгилеримизге коре, бу чалышма осюмликлернинъ метаболом динамикасыны координация этмек ичюн зайыф трансген осюмликлерни чыкъармакъ ве къабул этмек ичюн ЭТ къулланувында ЭТнинъ ролюнинъ биринджи кенъ ольчюли систематик тешкерювини тешкиль эте. От ашагъан айванларгъа хас олгъан ЭТ индукциясы сонъунда метаболом джевабыны модуляция эте биле. Энъ эмиетлиси – от ашагъанларгъа хас олгъан феноламидлернинъ де ново топланувыны ачыкълагъан ЭТ биосинтези (АСО) ве къабул этюв (ЭТР1) генлерининъ трансген манипуляциясыдыр. Эвельде ЭТ путресцин N-метилтрансферазаны низамлап, ДЖА-индукциялангъан никотин топланувыны инджеден низамлай биледжеги косьтерильген эди (49). Лякин механик джеэттен бакъкъанда, ЭТ фенамиднинъ индукциясыны насыл этип инджеден уйдургъаны белли дегиль. ЭТнинъ сигнал трансдукциясы функциясындан гъайры, полиаминофенол амидлерине ятырымны низамламакъ ичюн метаболизм акъымы S-аденозил-1-метионинге де маневрлене биле. S-аденозил-1-метионин — бу полиамин биосинтез ёлунынъ ЭТ ве Умумий ара маддесидир. ЭТ сигналы феноламиднинъ севиесини низамлагъан механизмни даа да зияде огренмек керек.
Узакъ вакъыт девамында белли олмагъан къурулышлы махсус метаболитлернинъ чокълугъы себебинден, белли бир метаболизм категорияларына интенсив дикъкъат биологик тесирлешювлерден сонъ метаболизм чешитлигининъ вакъыт денъишмелерини къатты къыймет кесе бильмей. Бугуньде-бугунь, малюмат назариеси талилине эсасланып, тарафсыз метаболитлер эсасында МС/МС спектрини алувнынъ эсас нетиджеси шунда ки, от ашагъан айванларны ашагъан я да импульсленген от ашагъан айванлар япракъ метаболомынынъ умумий метаболизм чешитлигини эксильтмеге девам этелер, айны вакъытта онынъ ихтисаслашув дереджесини арттыралар. От ашагъан айванларнынъ себебинден метаболом спецификасынынъ бу мувакъкъат артмасы транскриптома спецификасынынъ синергик артмасынен багълыдыр. Бу зияде буюк метаболом ихтисаслашувына (Si къыйметине зияде малик олгъан) энъ чокъ иссе къошкъан хусусиет эвельден характеристикалангъан от ашагъан функциягъа малик олгъан махсус метаболиттир. Бу модель ОД назариеси тахминине келише, амма метаболомны янъыдан программалавнынъ тасадифийлигинен багълы МТ тахминине келишмей. Лякин бу малюмат къарышыкъ моделнинъ тахминине де келише (энъ яхшы МТ; 1В рес.), чюнки къорчалав функциялары белли олмагъан дигер характеристикасыз метаболитлер даа тасадифий Si пайлашувыны излей билелер.
Бу араштырма тарафындан даа зияде къаплангъан дикъкъаткъа ляйыкъ бир шекиль шунда ки, микроэволюция севиесинден (бир осюмлик ве тютюн популяциясы) башлап, даа буюк эволюцион ольчюге (якъын сойдаш тютюн чешитлери) эволюцион тешкилятнынъ чешит севиелери «энъ яхшы къорчалавда» ола От ашагъан айванларнынъ къабилиетлеринде эмиетли фаркълар бар. Мур ве башкъалар. (20) ве Кесслер ве Кальске (1) мустакъиль оларакъ Уиттакер (50) тарафындан ильк оларакъ айырылгъан биочешитликнинъ учь функциональ севиесини химиявий чешитликнинъ конститутив ве индукциялангъан вакъыт денъишмелерине чевирмеге теклиф эттилер; бу муэллифлер не умумийлештирдилер Метаболом малюматларыны кенъ ольчюде топлав процедураларында да бу малюматлардан метаболизм чешитлигини насыл эсапламакъ кереклиги косьтерильмей. Бу тедкъикъатта Уиттакернинъ функциональ таснифине япылгъан кичик тюзетмелер α-метаболизм чешитлигини берильген осюмликтеки МС/МС спектрлерининъ чешитлиги оларакъ, β-метаболизм чешитлигини исе бир группа популяцияларнынъ эсас тюр ичиндеки метаболизми оларакъ бакъаджакъ Космос, γ-метаболизм чешитлиги исе анализ бенъзешининъ узатмасы оладжакъ.
JA сигналы от ашагъан айванларнынъ метаболизм джевапларынынъ кенъ спектри ичюн пек муимдир. Лякин JA биосинтезининъ тюр ичиндеки низамланувынынъ метаболом чешитлигине къошкъан иссеси акъкъында къатты микъдарий тестлер ёкъ ве JA сигналы даа юксек макроэволюцион ольчюде стресс иле мейдангъа кельген метаболизмнинъ чешитлешмеси ичюн умумий ер олып оламы, бу даа тапылмай. Биз Nepenthes от ашагъан айваннынъ от ашагъан табиаты метаболом ихтисаслашувыны индюкация эте ве Nicotiana чешитлерининъ популяциясы ичинде ве якъын сойдаш Nicotiana чешитлери арасында метаболом ихтисаслашувынынъ денъишмеси JA сигнал берювнен систематик мусбет корреляцияда олгъаныны козьде туттыкъ. Бундан да гъайры, JA сигналы бозулгъанда, бир генотипли от ашайджы тарафындан индюкация этильген метаболизм спецификасы лягъу этиледжек (3 рес., С ве Е). Табиий зайыфлашкъан Непентес популяцияларынынъ метаболизм спектрининъ денъишмелери эксериетле микъдарджа олгъанындан, бу талильде метаболизмнинъ β чешитлиги ве спецификлигиндеки денъишмелернинъ себеби буюк ольчюде метаболитлерге зенгин олгъан бирикме категорияларынынъ кучьлю къозгъалувы ола биле. Бу муреккеп сыныфлар метаболом профилининъ бир къысмында укюм сюре ве JA сигналларынен мусбет корреляциягъа кетире.
Онъа якъын багълы олгъан тютюн чешитлерининъ биохимик механизмлери пек фаркълы олгъаны ичюн, метаболитлер кейфиет джеэттен махсус белли ола, шунынъ ичюн о, даа аналитиктир. Информацион назариенинъ тутулгъан метаболизм профилини ишлемеси от ашагъанларнынъ индукциясы метаболизмнинъ гамма чешитлиги ве ихтисаслашув арасындаки компромиссни кескинлештиргенини косьтере. Бу компромиссте JA сигналы меркезий роль ойнай. Метаболом ихтисаслашувынынъ артмасы эсас ОД прогнозына келише ве JA сигналынен мусбет корреляцияда, JA сигналы исе метаболизм гамма чешитлигинен менфий корреляциядадыр. Бу моделлер осюмликлернинъ ОД къабилиети эсасен, истер микроэволюцион ольчюде, истер даа буюк эволюцион ольчюде, Д.А. JA биосинтезининъ къусурларыны айланып кечкен экзоген JA къулланув теджрибелери даа бойле шейни косьтере: якъын сойдаш тютюн чешитлерини, айны оларнынъ JA шекили ве от ашагъан айванлар тарафындан индюкация этильген метаболома пластичности киби, сигналгъа джевап берген ве сигналгъа джевап бермеген тюрлерге айырмакъ мумкюн. Сигналгъа джевап бермеген тюрлер эндоген ДжА чыкъарып оламагъанлары себебинден джевап бере бильмейлер ве шунынъ ичюн физиологик сынъырлавларгъа огърайлар. Бунъа JA сигнал ёлундаки базы эсас генлердеки мутациялар себеп ола биле (N. crescens махлюкъында AOS ве JAR4). Бу нетидже, бу тюрлерара макроэволюцион шекиллернинъ эсасен ички гормон къабулы ве джевап берювиндеки денъишмелернен багълы ола бильгенини айдынлата.
Осюмликлер ве от ашагъан айванлар арасындаки тесирлешювден гъайры, метаболизм чешитлигини араштырув этраф муитке биологик уйгъунлашувны ве муреккеп фенотипик чизгилернинъ эволюциясыны араштырувдаки бутюн муим назарий илерилевлернен багълыдыр. Земаневий МС алетлери тарафындан эльде этильген малюматнынъ микъдары арткъан сайын, метаболизм чешитлиги боюнджа гипотезаларны сынамакъ энди индивидуаль/категория метаболит фаркъларындан кечип, бекленильмеген шекиллерни ачыкъламакъ ичюн глобаль талиль япмакъ мумкюн. Буюк ​​ольчюли талиль джерьянында муим метафора – бу малюматны араштырмакъ ичюн къулланмакъ мумкюн олгъан маналы хариталарны тюшюнип чыкъармакъ гъаесидир. Демек, тарафсыз МС/МС метаболомикасы ве малюмат назариеси шимдики комбинациясынынъ муим нетиджеси шунда ки, о, чешит таксономик ольчюлерде метаболизм чешитлигини козьден кечирмек ичюн харита къурмакъ ичюн къулланмакъ мумкюн олгъан адий метриканы теминлей. Бу усулнынъ эсас талабыдыр. Микро/макро эволюция ве джемаат экологиясыны огренюв.
Макроэволюцион севиеде Эрлих ве Рейвеннинъ (51) осюмликлер ве боджеклернинъ коэволюциясы назариеси озьеги тюрлерара метаболизм чешитлигининъ денъишмеси осюмликлернинъ несиль чешитлешмесининъ себеби олгъаныны тахмин этмектир. Лякин бу ильк эсернинъ нешир этильген сонъки элли йыл ичинде бу гипотеза сийрек сынавдан кечирильди (52). Бу, эсасен, узакъ месафели осюмликлернинъ несильлери боюнджа тенъештирильген метаболизм хусусиетлерининъ филогенетик хусусиетлеринен багълыдыр. Надирликни макъсадлы талиль усулларыны беклемек ичюн къулланмакъ мумкюн. Информацион назарие тарафындан ишленген шимдики МС/МС иш акъымы белли олмагъан метаболитлернинъ МС/МС къурулыш бенъзешини микъдарджа эсаплай (эвельден метаболитлерни сечип алмадан) ве бу МС/МС-лерни МС/МС-нинъ бир джемисине чевире, бойлеликнен, профессиональ метаболизмде Бу макроэволюцион моделлер тасниф ольчюсинде тенъештириле. Саде статистик косьтергичлер. Бу джерьян филогенетик талильге бенъзей, о, эвельден тахмин этмеден, чешитлешюв сурьатыны я да хусусиетлернинъ эволюциясыны микъдарджа эсапламакъ ичюн сыраларнынъ догърултувыны къуллана биле.
Биохимик севиеде Фирн ве Джонснынъ (53) скрининг гипотезасы эвельден багълы олмагъан я да ерине къоюлгъан метаболитлернинъ биологик фаалиетини эда этмек ичюн хаммалны темин этмек ичюн метаболизм чешитлиги чешит севиелерде сакълангъаныны косьтере. Информацион назарие усуллары бойле бир черчивени темин этелер ки, онда метаболитлернинъ ихтисаслашмасы вакътында пейда олгъан бу метаболитлерге хас эволюцион кечювлерни теклиф этильген эволюцион скрининг джерьянынынъ бир къысмы оларакъ микъдарджа эсапламакъ мумкюн: алчакъ спецификликтен юксек спецификликке биологик фааль уйгъунлашув Берильген муитнинъ ингибирленген метаболитлери.
Эписи олып, молекуляр биологиянынъ ильк девирлеринде осюмликлерни къорчалав боюнджа муим назариелери ишлеп чыкъылды ве дедуктив гипотезаларгъа эсаслангъан усуллар кениш суретте ильмий илерилевнинъ екяне вастасы оларакъ сайыла. Бу, эсасен, бутюн метаболомны ольчемекнинъ техникий сынъырланувларынен багълыдыр. Фарзларгъа эсаслангъан усуллар башкъа себеп-нетидже механизмлерини сечип алувда айрыджа файдалы олсалар да, оларнынъ биохимик агълар акъкъында бизим анълавымызны илерилетмек къабилиети, шимдики вакъытта малюматларгъа чокъ сарф этильген илимде булунгъан эсаплав усулларындан зияде сынъырлыдыр. Демек, огюнде айтып оламагъан назариелери эльде олгъан малюматларнынъ сынъырларындан чокъ тыштыр, шунынъ ичюн араштырма саасындаки илерилевнинъ гипотезалы формуласы/сынав девирини лягъу этмек мумкюн дегиль (4). Биз огюнде коремиз ки, мында кирсетильген метаболомиканынъ эсаплав иш акъымы метаболизм чешитлигининъ якъын (насыл) ве сонъки (не ичюн) меселелерине меракъны янъыдан къозгъай биле, ве назарий джеэттен идаре этильген малюмат илимининъ янъы деврине иссе къоша биле. Девир эвельки несиллерни ильхамландыргъан муим назариелери янъыдан тешкерильди.
От ашагъанларнен догърудан-догъру гъыдаланув экинджи инстар личинкасыны я да Sl личинкасыны бир гуль ачкъан осюмликнинъ бирден-бир Ачыкъ ренкли къумракъ осюмлиги япрагъында осьтюрмек ёлунен япыла, эр бир осюмликке 10 осюмлик копиясы ола. Боджеклернинъ личинкалары къыскъычларнен къыстырылды, къалгъан япракъ токъумасы исе инфекциядан 24 ве 72 саат кечкен сонъ топланды ве тез бузлатылды, метаболитлер чыкъарылды.
От ашагъан айванларнен юксек синхронлаштырылгъан шекильде тедавийлевни импульслендиринъиз. Усул бойледир: къумач орьнекли копчеклерни къулланып, къумач гирлянданынъ осьюв девиринде осюмликнинъ учь толусынен кенишлеген япрагъынынъ орта къабургъасынынъ эр бир тарафында учь сыра тикенни тешмек ве деръал 1:5 ольчюде Сувутылгъан Мс. Бир япракъны юкъарыда тасвирленгени киби джыйып ишленъиз. Биринджи метаболитлерни ве осюмлик гормонларыны чыкъармакъ ичюн эвельден тасвирленген усулны къулланынъыз (54).
Экзоген JA къулланмалары ичюн эр бир тюрнинъ алты гуль чечек ачкъан осюмликлернинъ эр бирининъ учь япракълы япрагъы 20 мкл ланолин пастасынен, теркибинде 150 мкг MeJA (Lan + MeJA), ве 20 мкл ланолин плюс яра тедавийлеви (Lan0 μl la2) иле ишлене, я да контроль а мкл pur. Япракълар ишленген сонъ 72 саат кечкен сонъ джыйылды, сувлу азотта бузлатылды ве къулланылгъандже -80°С температурада сакъланды.
Бизим араштырма группамызда дёрт JA ве ET трансген сызыгъы, яни irAOC (36), irCOI1 (55), irACO ве sETR1 (48) белли этильди. irAOC JA ве JA-Ile севиелери кучьлю шекильде эксильгенини косьтере, irCOI1 исе JA-лерге сезимли дегиль эди. ЭВ иле тенъештирильгенде, ДЖА-Иленинъ топланмасы артты. Айны шекильде, irACO ЭТ чыкъарувыны эксильтеджек, ЭВ иле тенъештирильгенде, ЭТ-ге сезимсиз олгъан sETR1 исе ЭТ чыкъарувыны арттырыр.
ЭТ ольчюсини инвазив олмагъан шекильде япмакъ ичюн фотоакустик лазер спектрометри (Sensor Sense ETD-300 акъикъий вакъыттаки ЭТ датчиги) къулланыла. Тедавийленген сонъ деръал япракъларнынъ ярысыны кесип, 4 мл къапалы джам флаконгъа авуштырдылар ве баш бошлугъыны 5 саат ичинде топламагъа ёл бердилер. Ольчю вакътында эр бир флаконны 8 дакъкъа девамында 2 литр/саат темиз ава акъымынен ювдылар, бу ава эвельде СО2 ве сувны чыкъармакъ ичюн Sensor Sense тарафындан берильген катализатордан кечкен эди.
Микромассивнинъ малюматлары ильк оларакъ (35) санында басылды ве Биотехнология малюмат миллий меркезининъ (NCBI) Ген экспрессиясы эр тарафлама малюмат базасында (GSE30287 къошулув номерасы) сакъланды. Бу чалышма ичюн W + OSMs тедавийлеви ве зарарланмагъан контрольнинъ себебинден пейда олгъан япракъларгъа келишкен малюматлар чыкъарылды. Хам интенсивлиги лог2 ола. Статистик талильден эвель R программа пакетини къулланып, темель сызыкъ озь 75-нджи процентилине чевирильди ве нормаллештирильди.
Nicotiana чешитлерининъ ильк РНК секвенсированиеси (RNA-seq) малюматлары NCBI къыскъа окъув архивлеринден (SRA) алынды, проектнинъ номерасы PRJNA301787, бу акъта Чжоу ве башкъалары хабер эттилер. (39) ве (56) ифадесинде тасвирленгени киби япынъыз. Бу чалышмада талиль этмек ичюн Nicotiana чешитлерине келишкен W + W, W + OSM ве W + OSS1 тарафындан ишленген хаммал малюматлар сечильди, ве бойле шекильде ишленди: Биринджиден, хаммал RNA-seq окъувлары FASTQ форматына чевирильди. HISAT2 FASTQ-ны SAM-ге, SAMtools исе SAM файлларыны сыралангъан BAM файлларына чевире. StringTie ген экспрессиясыны эсапламакъ ичюн къулланыла, онынъ экспрессия усулы исе бойледир: миллион сыралы транскрипция парчасына бинъ база парчасына фрагментлер бар.
Анализде къулланылгъан «Акклам» хроматографик колонкасы (150 мм х 2,1 мм; парчачыкъларнынъ колеми 2,2 мкм) ве 4 мм х 4 мм къорчалайыджы колонкасы бир материалдан ибарет. Dionex UltiMate 3000 Ultra Юксек Перформанслы Сув Хроматографиясы (UHPLC) системасында бойле экилик градиент къулланыла: 0 дан 0,5 дакъкъагъадже, изократ 90% А [деионлаштырылгъан сув, 0,1% (об/об) атсетонитрил ве ВВ005% атсетонитрил ве 0,05% В1 кислота ичюн. 0,05% мурдар кислотасы); 0,5 — 23,5 дакъкъагъадже градиент фазеси 10% А ве 90% В ола; 23,5 — 25 дакъкъа, изократик 10% А ве 90% В. Акъынты 400 мкл/дакъ. Бутюн МС анализлери ичюн колонна элюентини мусбет ионизация режиминде чалышкъан электропульверизатор менбасынен донатылгъан квадруполь ве учув вакъты (qTOF) анализаторына инъекция этинъиз (капилляр кергинлиги, 4500 В; капилляр чыкъыш 130 В ; Къурутув арарети 200°r li1r d).
Умумий тапыла бильген метаболизм профили акъкъында къурулыш малюматыны алмакъ ичюн малюматлардан эмиетсиз я да айырылмаз олгъан МС / МС фрагмент талилини (бундан сонъ МС / МС деп адландырыладжакъ) япынъыз. Айырмасыз МС/МС усулынынъ къаврайышы квадрупольнинъ пек буюк кутьле айырув пенджереси олгъанына эсаслана [шунынъ ичюн бутюн кутьле-заряд нисбети (м/з) сигналларыны парчачыкълар оларакъ бакъынъыз]. Бу себептен, Impact II алети СЕ эгильмесини яратып оламагъанындан, чарпышмадан догъгъан диссоциация чарпышма энергиясы (СЭ) къыйметлерининъ арттырылмасы ярдымынен бир къач мустакъиль талиль япылды. Къыскъадан айткъанда, башта нумюнени бир масса спектрометриясы режими (менба ичиндеки парчаланув иле пейда олгъан алчакъ парчаланув шараитлери) къулланып, 5 Гц текрарлав сыкълыгъында м/з 50-ден 1500-ге къадар сканерлемек ёлунен УВЭЖХ-электропульверизатор ионизациясы/qTOF-MS ёлунен талиль этинъиз. МС/МС анализи ичюн чарпышма газы оларакъ азотны къулланынъыз ве ашагъыдаки дёрт чешит чарпышмадан пейда олгъан диссоциация кергинликлеринде мустакъиль ольчюлер япынъыз: 20, 30, 40 ве 50 эВ. Бутюн ольчю джерьяны девамында квадрупольнинъ энъ буюк кутьлевий изоляция пенджереси бар, м/з 50-ден 1500-гедже.Ог джесетнинъ м/з ве изоляция кенълиги эксперименти 200-ге къоюлгъанда, масса диапазоны автоматик оларакъ алетнинъ ишлетюв программасы ве 0 Да тарафындан фаальлештириле. Бир кутьлевий режимде олгъаны киби, кутьлевий парчачыкъларны сканерленъиз. Кутьлевий калибровка ичюн натрий формальдегини (50 мл изопропанол, 200 мкл мурджие кислотасы ве 1 мл 1М NaOH сувлу илядж) къулланынъыз. Брукернинъ юксек догърулыкълы калибровка алгоритмини къулланып, малюмат файлы белли бир вакъыт девамында орта спектрни чалыштыргъан сонъ калибрлене. Хаммал малюмат файлларыны NetCDF форматына чевирмек ичюн Data Analysis v4.0 программасынынъ (Brook Dalton, Бремен, Алмания) экспорт функциясыны къулланынъыз. MS/MS малюматлар топламы MetaboLights (www.ebi.ac.uk) ачыкъ метаболомика малюмат базасында къошулув ракъамнен берабер сакъланды. МТБЛС1471 ола.
МС/МС джыйыштырувыны алчакъ ве юксек чарпышма энергиясы ичюн МС1 ве МС/МС кейфиет сигналлары арасында корреляция талили ве янъы амельге кечирильген къаиделери вастасынен омюрге кечирмек мумкюн. R скрипти махсулаткъа прекурсорнынъ даркъалувынынъ корреляция талилини амельге кечирмек ичюн къулланыла, къаиделери омюрге кечирильмеси ичюн исе C# скрипти (https://github.com/MPI-DL/indiscriminant-MS-MS-assembly-pipeline) къулланыла.
Фон шувултысы ве тек бир къач нумюнеде белли бир м/з хусусиетлерини тапмакътан пейда олгъан яланджы мусбет хаталарны ве яланджы корреляцияны эксильтмек ичюн биз R пакетининъ «толдурылгъан тёпе» функциясыны къулланамыз XCMS (фон шувултысынынъ интенсивлигини тюзетмек ичюн) «NAtendeu» ерине къулланмакъ керек. Толдурув тёпеси функциясы къулланылгъанда, малюматлар топламында даа чокъ «0′′ интенсивлик къыйметлери бар, олар корреляция эсабына тесир этеджеклер.Сонъра, биз толдурылгъан тёпе функциясы къулланылгъанда ве толдурылгъан тёпе функциясы къулланылмагъанда эльде этильген малюмат ишлев нетиджелерини тенъештиремиз ве бу тюзетильген фон шувултысы къыйметини эсаплаймыз. эсаплангъан фон къыймети олгъан интенсивлик къыйметлерини Биз де тек интенсивлиги фон къыйметинден учь кере зияде олгъан хусусиетлерни козь огюне алдыкъ ве оларны «керчек тёпелери» деп сайдыкъ. ПКК эсаплавлары ичюн тек нумюневий прекурсорнынъ (МС1) м/з сигналлары ве энъ аздан секиз догъру тёпеси олгъан фрагмент малюмат топламлары козьде тутула.
Эгер бутюн нумюнедеки прекурсор кейфиет хусусиетининъ интенсивлиги алчакъ я да юксек чарпышма энергиясына огърагъан айны кейфиет хусусиетининъ эксильген интенсивлигинен эмиетли корреляцияда олса ве хусусиет CAMERA тарафындан изотоп тёпеси оларакъ бельгиленмеген олса, оны даа да бельгилемек мумкюн. Сонъра 3 с ичинде бутюн мумкюн олгъан прекурсор-махсулат чифтлерини эсаплап (пик тутув ичюн тахминли тутув вакъты пенджереси) корреляция талили япыла. Тек м/з къыймети прекурсор къыйметинден эксик олгъанда ве МС/МС парчаланувы малюмат топламында о алынгъан прекурсорнен бир нумюне еринде олып кечкенде, о парчаланув сайыла.
Бу эки адий къаидеге эсасланып, биз белли этильген прекурсорнынъ м/з къыйметлеринден м/з къыйметлеринден буюк олгъан белли бир парчачыкъларны чыкъарамыз, эм де прекурсор пейда олгъан нумюневий ерлешювге ве белли бир парчагъа эсасланамыз. Бундан да гъайры, MS1 режиминде мейдангъа кельген бир чокъ менба ичиндеки фрагментлернинъ мейдангъа кетирген кейфиет хусусиетлерини намзет прекурсорлар оларакъ сечип алмакъ мумкюн, ве бунынънен артыкъча MS/MS бирикмелери мейдангъа кетириле. Бу малюматларнынъ артыкъчалыгъыны эксильтмек ичюн, эгер спектрлернинъ НДП бенъзеви 0,6-дан зияде олса, ве олар CAMERA тарафындан аннотациялангъан хроматограмма «pcгруппасына» аит олсалар, биз оларны бирлештиреджекмиз. Ниает, биз чешит чарпышма энергияларында айны м/з къыйметке малик олгъан бутюн намзет тёпелери арасында энъ юксек интенсивлик тёпесини сечип алмакъ ёлунен, прекурсор ве фрагментлернен багълы олгъан дёрт СЕ нетиджесининъ эписини сонъки деконволюциялангъан композит спектрге бирлештиремиз. Сонъки ишлев адымлары муреккеп спектр къаврайышына эсаслана ве парчаланув имкяныны энъ юксек севиеге чыкъармакъ ичюн керек олгъан чешит СЕ шараитлерини эсапкъа алалар, чюнки базы парчачыкъларны тек белли бир чарпышма энергиясы алтында тапмакъ мумкюн.
Метаболизм профилининъ индукцияланувыны эсапламакъ ичюн РДПИ (30) къулланылды. Метаболизм спектрининъ чешитлиги (Hj индекси) Мартинес ве башкъалары тарафындан тасвирленген ашагъыдаки мусавийлеме ярдымынен МС/МС сыкълыкъ пайлашмасынынъ Шеннон энтропиясыны къулланып, МС/МС прекурсорларынынъ чокълугъындан алынгъан. (8). Hj = −∑i = 1mPijlog2(Pij) мында Pij j-нджи нумюнедеки i-нджи МС/МСнинъ нисбий сыкълыгъына келише (j = 1, 2,..., m) (i = 1, 2, ..., m) t).
Метаболизм спецификасы (Si индекси) бакъылгъан нумюнелер арасындаки сыкълыкъкъа коре берильген МС/МСнинъ ифаде айнылыгъы оларакъ бельгилене. МС/МС спецификлиги Si = 1т (∑j = 1тПижПилог2ПижПи) шекилинде эсаплана.
Эр бир j нумюненинъ метаболомгъа хас δj индексини ольчемек ичюн ашагъыдаки формуланы къулланынъыз, МС/МС хаслыгъынынъ орталамасыны исе δj = ∑i = 1mPijSi .
МС/МС спектрлери чифт-чифт тегизлене, эки баллгъа эсасланып, бенъзешюв эсаплана. Биринджиден, стандарт НДП (косинус корреляция усулы оларакъ да белли) къулланып, ашагъыдаки мусавийликни къулланып, спектрлер арасындаки сегмент бенъзешмесини бааламакъ мумкюн НДП = (∑iS1 & S2WS1, iWS2, i) 2∑iWS1, i2∑iWS2, i2 мында S1 ве S2 къую оларакъ iWS2, спектр ичюн, i эки спектр арасындаки i-нджи умумий тёпенинъ фаркъы 0,01 Да-дан эксик олгъан тёпе интенсивлигине эсаслангъан агъырлыкъны косьтере. Агъырлыкъ бойле эсаплана: W = [энъ юксек интенсивлик] m [кейфиет] n, m = 0,5, n = 2, буны MassBank теклиф эте.
Экинджи балл къоюв усулы омюрге кечирильди, о, МС/МС арасындаки ортакъ НЛ-ни талиль этмекни козьде тутты. Бунынъ ичюн биз тандемде МС парчаланув джерьянында сыкъ расткельген 52 НЛ джедвелини ве зайыфлашкъан Nepenthes чешитининъ экинджи дереджели метаболитлерининъ МС/МС спектри ичюн эвельден аннотациялангъан даа специфик НЛ (S1 малюмат файлы) къулландыкъ ( 9, 26). Эр бир МС/МС ичюн 1 ве 0 экилик векторны яратынъыз, олар сырасынен базы НЛ-лернинъ шимдики ве ёкълугъына келишкен. Евклиднинъ месафе бенъзешмесине эсасланып, эр бир чифт экилик НЛ векторлары ичюн НЛ бенъзешме балы эсаплана.
Эки кластерлештирювни япмакъ ичюн биз DiffCoEx R пакетини къулландыкъ, о, агъырлыкълы генлернинъ коэкспрессия талили (WGCNA) кенишлетмесине эсаслана. МС/МС спектрлерининъ НДП ве НЛ балл матрицаларындан файдаланып, тенъештирюв корреляция матрицасыны эсапламакъ ичюн DiffCoEx къулландыкъ. Экилик кластерлештирюв «cutreeDynamic» параметрини усул = «гибрид», cutHeight = 0,9999, deepSplit = T, minClusterSize = 10 ерине къойып япыла.DiffCoExнинъ R менба кодуны къошма файлдан Tesson ве башкъалары юкледилер. (57); Керекли R WGCNA программа пакетини https://horvath.genetics.ucla.edu/html/КоэкспрессионНетворк/Rpackages/WGCNA адресинден тапмакъ мумкюн.
MS/MS молекуляр агъ талилини япмакъ ичюн биз NDP ве NL бенъзешюв чешитлерине эсасланып чифт спектраль багъланувны эсапладыкъ, ве CyFilescape yFiles планлаштырув алгоритмининъ кенишлетюв къулланмасында органик планлаштырувны къулланып агъ топологиясыны корьгезмек ичюн Cytoscape программасыны къулландыкъ.
Малюматлар узеринде статистик талиль япмакъ ичюн R 3.0.1 версиясыны къулланынъыз. Статистик эмиет дисперсиянынъ эки тарафлы талили (АНОВА) ярдымынен къыймет кесильди, сонъра Тукейнинъ намуслы эмиетли фаркъ (НЭФ) пост-хок тести кечирильди. От ашагъанларнен тедавийлев ве контроль арасындаки фаркъны талиль этмек ичюн, Студентнинъ t тести ярдымынен айны дисперсиялы эки группа нумюненинъ эки къуйрукълы пайлашмасы талиль этильди.
Бу макъаленинъ къошма материалларыны http://advances.sciencemag.org/cgi/content/full/6/24/eaaz0381/DC1 адресинден алмакъ мумкюн.
Бу Creative Commons Attribution-Non-Commercial License шартларына коре даркъалгъан ачыкъ иришильген макъаледир, о, эр бир муитте къулланмагъа, даркъатмагъа ве чокълаштырмагъа имкян бере, тек сонъки къулланув тиджарет къазанчы ичюн олмаса ве премема асыл эсернинъ догъру олгъаны олса. Атыф.
Ишарет: Биз тек сизден почта адресинъизни бермеге риджа этемиз, сиз саифеге тевсие этеджек адам сиз почтаны корьмеге истегенинъизни ве бу спам олмагъаныны бильсин. Биз ич бир почта адресини запт этмейджемиз.
Бу суаль сизнинъ мусафир олгъанынъызны тешкермек ве автоматик спам ёлланмасынынъ огюне кечмек ичюн къулланыла.
Информацион назарие махсус метаболомларны тенъештирмек ве тест къорчалав назариелерини тахмин этмек ичюн универсаль валюта теминлей.
Информацион назарие махсус метаболомларны тенъештирмек ве тест къорчалав назариелерини тахмин этмек ичюн универсаль валюта теминлей.
©2021 Илимнинъ илерилеви ичюн Америка бирлешмеси. бутюн акълар сакълангъан. АААС - ХИНАРИ, АГОРА, ОАРЕ, ХОР, КЛОКСС, КроссРеф ве САЙЧЫКЪнынъ шериклеридир. Илимнинъ илерилеви ISSN 2375-2548.